MIB-1染色法について
標準化に向けてのJBTRCよりの提案
- フォルマリン固定・パラフィン包埋組織を薄切
（3μmに薄切し，シランコーティングスライドガラスに貼付。37℃の恒温槽で一晩乾燥密着させる。） - 脱パラフィン （キシロール 3回）
- 脱キシロール （100%アルコール 3回）
- 内因性ペルオキシダーゼ活性ブロック （0.3%H2O2－メタノール溶液 室温30分）
- 洗浄 （アルコール100%→70%→40%→水道水→蒸留水→PBS）
- 抗原性賦活化処理 （0.01Mクエン酸緩衝液pH6.0を賦活溶液とし，オートクレーブ121℃10分間）
- 正常動物血清処理 （10%ウサギ血清 室温30分）
↓PBS洗浄 2～3回 - MIB-1抗体反応 （ダコ・ジャパンＭ7240，抗体濃度1:100，4℃一晩）
↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回 - 二次抗体反応 （ビオチン標識抗マウスIgG+IgA+IgM抗体*，室温30分間）
↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回 - 酵素試薬 （ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン*室温30分間）
↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回 - 発色 （DAB-H２O２溶液 室温5分間）
↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回 - 希オスミウム酸溶液** 室温5分間
↓水道水洗浄 1～2分間 - 核染 （マイヤーのヘマトキシリン 6分間）
↓色出し（流水1～2分間） - 脱水・透徹・封入
* ヒストファインSAB-PO（M）キット，ニチレイ，東京
** 希オスミウム酸溶液による処理は省略してもよい。
*** 本染色法は、佐藤貴子，松尾優紀の論文に基づいて作成した。